引言

冰冻切片是术中快速病理诊断的关键技术，但操作中常遇到切片碎裂、卷曲、染色不佳等问题。本文系统梳理了5大常见问题，并提供解决方案，帮助您提高切片质量！

一、切片碎裂或分层

可能原因：

1.组织未完全冷冻（温度不够低或冷冻时间不足）。

2.切片刀钝或刀角设置不当。

3.组织内含脂肪或纤维成分较多（如乳腺、甲状腺）。

解决方案：

①充分冷冻：

-使用OCT包埋剂，确保组织在-20℃~-25℃下冷冻10~15分钟。

-脂肪组织可预冷至-30℃。

②调整切片刀：

-更换锋利刀片，刀角设置为5°~10°。

③辅助措施：

-在组织表面滴加少量70%酒精，减少冰晶形成。

二、切片卷曲或皱褶

可能原因：

1.切片厚度不均（太薄或太厚）。

2.防卷板未调节到位。

3.组织硬度不均（如肿瘤伴坏死）。

解决方案：

①控制切片厚度：

-常规诊断用4~5um，特殊研究可切10~20um。

②调节防卷板：

-使防卷板边缘与刀片平行，距离切片约1mm。

③优化组织处理：

-避免组织中有气泡或坏死区，必要时修平组织块。

三、切片粘刀或难以展开

可能原因：

1.载玻片温度过低（与切片温差大）。

2.切片时室温过高（导致组织软化）。

解决方案：

①预热载玻片：

-用手指温热载玻片，或短暂放置于37℃温台。

②控制环境温度：

-保持切片室温度在20℃~22℃，湿度40%~60%。

四、染色模糊或对比度差

可能原因：

1.切片未及时固定（导致细胞溶解）。

2.染色液过期或污染。

3.冲洗不充分（残留苏木素或伊红）。

解决方案：

①快速固定：

-切片后立即用95%酒精固定30秒~1分钟。

②更换染液：

-苏木素每2周过滤，伊红每1个月更换。

③充分冲洗：

-流水冲苏木素5~10秒，分化液（1%盐酸酒精）1~2秒。

五、组织脱落（脱片）

可能原因：

1.载玻片未涂粘附剂（如多聚赖氨酸）。

2.冲洗时水流过猛。

3.组织富含血液或黏液（如胃肠道标本）。

解决方案：

①增强粘附：

-使用正电荷载玻片或提前涂布APES胶。

②轻柔操作：

-冲洗时水流方向与切片呈45°角，避免直接冲击。

冰冻切片操作口诀

1.冷冻要透(-25℃)→2.刀快角小(5°)→3.防卷调好→4.玻片微温→5.快固定快染→6.轻冲防脱

注：对疑难组织（如骨、脂肪），可先预实验优化条件

您在冰冻切片中还遇到过哪些问题？欢迎留言讨论！

参考文献

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